1933年8月，經過時任日本陸軍大臣荒木貞夫批準，石井四郎在中國東北宣化街與交叉口一帶設立了秘密細菌研究基地，并開始使用中國及朝鮮平民做活體實驗 。這支臭名昭著的細菌部隊冠名為"部隊"，石井四郎稱自己為"東鄉大尉"，目的就是用于紀念自己非常崇拜的日軍戰神東鄉平八郎元帥 。"東鄉部隊"在這里除了進行了慘絕人寰的、、和活體實驗，還進行了活體凍傷實驗，以便驗證日軍士兵在天寒地凍的西伯利亞與俄軍交戰的耐寒程度 。從目前日本學者披露的資料來看，"東鄉部隊"以凍死凍殘數百名中國平民的代價，驗證出了人類的耐寒極限及凍傷后最佳治療方式為在37度的水里面浸泡的結果 。而那些因為實驗而死亡的中國平民，就被丟進了焚尸爐毀尸滅跡 。
1934年秋，石井四郎的"東鄉部隊"出現了危機 。先是以王子揚為首的12名中國"實驗品"成功從研究所逃脫 。接著這個試驗所又受到了趙尚志將軍領導的抗日聯軍武裝的多次攻擊 。為了不泄露這個日本的秘密研究項目 。石井四郎向上級申請，將研究所搬遷到哈爾濱日本陸軍醫院的南院，并將其對外名稱改為關東軍，內部編號731 。石井四郎擔任該部部長，軍銜晉升為陸軍中佐 。
1939年，經過兩年多的不斷擴大，731部隊成為一個滿員編制為2600人，配有一名中將和四名少將的高級生化、細菌武器兵工廠 。石井四郎也因為在當年日本與蘇蒙聯軍的戰役中成功向敵方投擲22.5公斤沙門菌和傷寒菌，給蘇蒙聯軍造成巨大殺傷而榮獲個人功四級 。
1940年7月至1941年12月，731部隊先后在中國的浙江、湖南等地空投細菌武器，給中國抗日軍民造成了重大損失 。
1942年5月浙贛會戰，731部隊將注入腸傷寒菌、副傷寒菌的饅頭分發給3000余名饑腸轆轆的中國戰俘吃，然后將這些感染了細菌病毒的戰俘放回 。這一毒辣的陰謀直接導致中國軍民上萬人死亡，百萬人為生存逃離災區成為難民 。事后731部隊洋洋得意的在成果報告中寫道："派遣隊在現地調查的結果，傳染病突發并流行中最有效果的是副傷寒菌 。"
1944年，正當石井四郎的731部隊在瘋狂生產生化、細菌武器參戰的時候，其手下查獲了石井四郎貪污公款的罪證 。陸軍大本營一紙調令，將其調回了本土接受調查 。1945年3月，為了挽回敗局，陸軍大本營又將石井四郎調回了731擔任部長 。石井四郎對調查揭發他貪污的中留金藏中佐實施報復，將其調往太平洋戰場，結果中留金藏不到一個月就戰死了 。
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