he染色原理是什么
he染色原理是易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱為嗜堿性和嗜酸性 。對堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱為中性 。組織內(nèi)的蛋白質(zhì)構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸的種類很多，它們有不同的等電點(diǎn) 。
在普通染色法中，染色液的酸堿度為pH6左右，細(xì)胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細(xì)胞核的染色質(zhì)、腺細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜堿性 。
細(xì)胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細(xì)胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細(xì)胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色，這些物質(zhì)稱為嗜酸型 。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度，pH值升高時，則原來被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性；pH值降低時，原來被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝?。所以說染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng) 。
he染色方法什么叫he染色法呢1.蘇木精伊紅染色法，簡稱HE染色法，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。
2.蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)和胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色 。
3.伊紅為酸性染料 ， 主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色 。
4.HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)和科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法 。
5.原理：易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱為嗜堿性和嗜酸性 。
6.而對堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱為中性 。
he染色的實(shí)驗(yàn)原理方法及注意事項(xiàng)是什么HE染色全名為蘇木精(hematoxylin)和伊紅(eosin)染色方法，是最基本的也是最重要的病理學(xué)染色技術(shù) 。
HE染色是目前國內(nèi)外病理診斷上廣泛采用的 常規(guī)染色方法 。一張好的HE切片是保證正確病理診斷的關(guān)鍵 。切片質(zhì)量的好壞，可直接影響疾病診斷的及時與準(zhǔn)確性 。作為一個合格的實(shí)驗(yàn)技術(shù)員，能制作出一張高質(zhì)量的HE染色切片，是必須掌握的一門重要功課 。
HE染色的實(shí)驗(yàn)原理及注意事項(xiàng)
一、細(xì)胞核染色原理：
蘇木精為堿性天然染料，可使細(xì)胞核著色 。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA ， 在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外，使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色 。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色，所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色 。
二、細(xì)胞漿染色原理：
細(xì)胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì)，為兩性化合物、細(xì)胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系 ， 當(dāng)pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)4.7-5.0時，胞漿對外不顯電性，此時酸或堿性染料不易染色 。當(dāng)pH調(diào)到6.7-6.8時 ， 大于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)pH值，表現(xiàn)酸性電離 ， 而帶負(fù)電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現(xiàn)時胞核也被染色，核和胞漿難以區(qū)分 。因此必須把pH調(diào)至胞漿等電點(diǎn)以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負(fù)電荷（陰離子）的染料染色 。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子，與蛋白質(zhì)的氨基正電荷（陽離子）結(jié)合而使細(xì)胞漿染色，細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織，嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色，與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對比 。
三、分化作用：
染色后 ， 用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去，這個過程稱為分化作用，所用的溶液稱為分化液 。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液，因酸能破壞蘇木精的醌型結(jié)構(gòu)，使組織與色素分離而褪色 。經(jīng)蘇木精染色后，必須用0.5%鹽酸乙醇分化，使細(xì)胞核過多結(jié)合的蘇木精染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木精染料脫去，在進(jìn)行伊紅染色，才能保證細(xì)胞核與細(xì)胞漿染色的分明 。因此，在HE染色中分化是極為關(guān)鍵的一步 。
四、返藍(lán)作用：
分化之后，蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài)，呈紅色，在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài) ， 呈藍(lán)色 。組織切片經(jīng)0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色，故分化之后，立即用水除去組織切片上的酸而終止分化 ， 再用弱堿性水（0.2%氨水）使蘇木精染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色，這個過程稱為返藍(lán)作用或藍(lán)化作用 。另外用自來水浸洗也可使細(xì)胞核返藍(lán) ， 但所需時間較長 。
實(shí)驗(yàn)材料
固定液：常用95%乙醇和冰丙酮
蘇木精染液：稱取蘇木精粉0.5g，銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中 ， 然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰醋酸2ml，混合均勻，濾紙過濾，備用 。
伊紅染液：稱取0.5g水溶性伊紅染液，溶于100ml蒸餾水中 。
稀鹽酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1%鹽酸 。
系列濃度的乙醇、二甲苯、中性樹膠 。
培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、眼科鑷、蓋玻片、載玻片、顯微鏡 。
實(shí)驗(yàn)步驟
樣品制備：對于貼壁生長細(xì)胞，胰酶消化，調(diào)整細(xì)胞濃度約1×105/ml ， 滴加于蓋玻片上(置于6孔板中) ， 培養(yǎng)相應(yīng)時間后，取出細(xì)胞爬片 ， 用PBS 洗滌3次 。
樣品固定：95%乙醇固定20min，PBS洗滌2次，每次1min 。
染核：蘇木素染液染色2-3min ， 自來水洗滌 。
分色：鏡下觀察 ， 若細(xì)胞核染色過深，用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒 ， 自來水洗滌 。
染胞質(zhì)：浸入伊紅染液染色1min，自來水洗滌 。
吹干或自然晾干細(xì)胞 爬片后，中性樹膠封片 。
若細(xì)胞用4%多聚甲醛固定，則染色時間相應(yīng)延長，蘇木素染色12-15min，伊紅5min即可 。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果及注意事項(xiàng)
** 實(shí)驗(yàn)結(jié)果**
細(xì)胞核呈藍(lán)色，細(xì)胞質(zhì)，肌纖維 ， 膠原纖維和紅細(xì)胞呈不同程度的紅色 。鈣鹽和細(xì)菌可呈藍(lán)色或紫藍(lán)色
注意事項(xiàng)：
1. 染色時調(diào)節(jié)pH值很重要 。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長，組織酸化而影響細(xì)胞核著色 。因此，要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細(xì)胞核著色較深 。染伊紅時胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸 。
2. 切片染蘇木精后，分色這一步是關(guān)鍵，應(yīng)在顯微鏡下控制進(jìn)行 ， 一般以細(xì)胞核染色清楚（晰）而細(xì)胞質(zhì)基本無色為佳 。如果過分延長分色時間將導(dǎo)致染色太淺，應(yīng)重新染色后再行分色 。
3. 切片經(jīng)酒精脫水后，入二甲苯時可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài)，此為脫水不徹底 ， 應(yīng)將切片退回?zé)o水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹底脫水與透明 。

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