退火溫度怎么確定


退火溫度怎么確定


退火溫度確定的計算公式是:4×(G+C)+2×(A+T)-(5~8) 。退火溫度(AnnealingTemperature)是指引物和模板結合時候的溫度參數,當50%的引物和互補序列表現為雙鏈DNA分子時的溫度 。它是影響PCR特異性的較重要因素 。在理想狀態下,退火溫度足夠低,以保證引物同目的序列有效退火,同時還要足夠高,以減少非特異性結合 。合理的退火溫度從55℃到70℃ 。退火溫度一般設定比引物的Tm低5℃ 。

【退火溫度怎么確定】

    猜你喜歡