茶樹無色花色素還原酶基因克隆及表達分析 _茶葉文獻

采用EST測序技術和3＇RACE技術，獲得了茶樹兒茶素代謝途徑中的一個重要酶-無色花色素還原酶的全長基因，在GenBank的登錄號為EF205148 ，序列全長1301bp ，其中開放閱讀框長1029bp ，編碼342個氨基酸， 3’端有一個明顯的多聚腺苷酸加尾信號，推測的蛋白分子量約為37．5kD ，理論等電點為5．81 。將該基因重組到表達載體pET-32a（＋）中進行原核表達，經IPTG誘導、SDS．PAGE檢測，結果表明茶樹無色花色素還原酶基因能在大腸桿菌BL21中表達，電泳檢測到一條大約60kD的外源蛋白，與預測的融合蛋白分子量相符。同源性分析表明茶樹無色花色素還原酶基因編碼的氨基酸序列與其他植物具有較高的相似性，例如與亞洲棉、草莓和葡萄的相似性分別為70％、68％、71％。利用半定量PCR技術檢測總兒茶素含量不同的4個茶樹品種中與類黃酮合成相關的黃酮醇合成酶（FLS）、二氫黃酮醇．4．還原酶（DFR）、無色花色素還原酶（LAR）、花色素合成酶（ANS）等7個基因的表達情況，結果表明DFR和LAR基因的表達量與茶樹中總兒茶素含量呈一定的相關性，而其他基因則與其相關性不大。 【茶樹無色花色素還原酶基因克隆及表達分析】完成機構：中國農業科學院茶葉研究所茶樹資源與改良研究中心／國家茶樹改良中心,浙江杭州310008

茶樹無色花色素還原酶基因克隆及表達分析

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