摘 要 為了測定苦丁茶葉中總黃酮的含量 , 利用黃酮類化合物與金屬離子形成的螯合物在510nm處有最大吸收度 , 用分光光度法進行測定 。 效果滿意 , 方法簡便可靠 。
關鍵詞 分光光度法 苦丁茶葉 黃酮
中圖分類號 R284.1【苦丁茶葉中總黃酮的含量測定】
Determination of Total Flavone Content in Ilicis Folium Leaf
Zhang Yizhen
(Guangxi College of TCM Nanning 530001)
Li Jianming
(Guangxi Pharm aceutical school 530023)
Abstract Spectrophotometry was used to determine the total fla vone co ntent in Ilicis Folium leaf according to the fact that the maximum absorbency ca n be obtained when the chelate formed by the combination of flavonoids and metal ion is at 510 nm. The result has shown that the method for determination of the total flavone content in Ilicis Folium leaf is easy to handle and reliable with satisfactory result.
Key words Spectrphotometry Ilicis Folium leaf flavone
苦丁茶主要為冬青科植物枸骨(IlexCornutaLindl)和大葉冬青(IlexlatifilonThunb)的葉〔1〕 。 分布華東及廣西等地 。 具散風熱、清頭目、治頭痛等功用 , 常為日常飲茶之用 。 其所含主要化學成分為鞣質、皂甙、黃酮類〔2〕等成分 。 本文以蘆丁為對照品 , 用分光光度法測定其含量 , 效果滿意 , 方法簡便可靠 。
1 原理
黃酮類化合物與金屬離子能形成穩定的呈色螯合物;于510nm處有最大吸收 , 可用分光光度法進行測定〔3〕 。
2 儀器及試劑
采用721A型分光光度計(上海第三分析儀器廠);蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所提供);5%的亞硝酸鈉及5%硝酸鋁試液;4%氫氧化鈉試液;其余實驗所用試劑均為分析純 。
3 總黃酮的含量測定
3.1 測定波長的選擇
取樣品液適量 , 在0.3ml5%亞硝酸鈉存在的堿性條件下 , 經硝酸鋁顯色后 , 以試劑為空白參比 , 于420~700nm范圍內測定螯合物的吸收度;吸收曲線圖略 。 螯合物于510nm處有最大的吸收 。 故測定時選用此波長 。
3.2 標準曲線的繪制
分別精密吸取蘆丁對照液(0.1mg/ml)0.00,0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00ml于10ml容量瓶中 , 用60%乙醇稀釋至5.00ml , 分別加入5%亞硝酸鈉試液0.3ml , 搖勻 , 靜置6min , 再加5%硝酸鋁試液0.3ml , 搖勻 , 靜置6min , 再加4%氫氧化鈉試液4.00ml , 用60%乙醇釋釋至刻度 , 搖勻 , 靜置12min , 以試劑作空白 , 于510nm處測吸收度 , 得回歸方程:Y=0.8734X-0.0151 , r=0.9999 。
3.3 樣品總黃酮的含量測定
精密稱取苦丁茶粉末(40目)約3g , 加40ml95%乙醇 , 先泡0.5h , 回流提取2h , 抽濾 , 再加40ml95%乙醇回流提取1.5h , 抽濾 , 合并濾液 , 減壓回收乙醇至僅剩5~7ml為止 , 放100ml容量瓶中 , 用60%乙醇稀釋至刻度 , 得樣品液 。 精密吸取樣品液1.00ml , 置10ml容量瓶中 , 余下按3.2項下操作 , 測得吸收度 , 結果如表1 。
表1 樣品總黃酮的含量測定結果
編號樣品量(g)吸收度樣品總黃酮(%)均值(%)RSD(%)1—12.92730.5992.40
1—22.98970.6122.412.400.421—33.13050.6352.38
2—13.04640.6532.51
2—23.03500.6452.492.500.402—33.04250.6482.49
3.4 樣品加樣回收試驗
為驗證提取方法的可靠性 , 采用了將同一批的苦丁茶葉粉末(40目)稱取8份 , 每2份作一組 , 一份加入已知量的蘆丁對照品 , 在與測定方法相同條件下 , 進行提取和測量 , 結果如表2 。 表2 樣品加樣回收試驗結果
組別樣品含量
(mg)加入量
(mg)測得量
(mg)回收率
(%)171.565.8077.41100.06272.054.0076.15100.13374.533.6078.0999.95474.324.7079.0199.99
平均回收率(%)=100.04
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